一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：细胞系是在原代培养成功后首次进行传代所形成的细胞群体，主要由原代培养物中存在的细胞世系组成。

2. 细胞株（Cell Strain）：通过选择或克隆技术从原代培养物或细胞系中获得的，具有特定性质或标志物的细胞称为细胞株。细胞株的这些特性需在整个培养过程中始终存在。如果不能持续传代或者传代次数有限，这种细胞称为有限细胞株（finite cell strain）；相反，如果能够连续传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过半年且生长稳定，能够持续传代，则可称之为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞能否被认定为已鉴定的细胞，取决于具体情况，且没有统一的标准。原代培养的细胞要求供体具有均一性，取材部位及组织种类需稳定。长期培养及重复传代的细胞常需以下说明：

1. 组织来源：应明确细胞供体的物种、性别、年龄以及取材的器官或组织。如系肿瘤组织，需提供临床及病理诊断信息及病历号。

2. 细胞生物学检测：包括细胞的形态、特征结构、生长曲线、分裂指数、倍增时间及接种率等。如为肿瘤细胞，则需进行软琼脂培养、异体接种致瘤及正常组织的侵润实验以证明其性质。

3. 培养条件与方法：需说明细胞系（或株）适应的生存环境，包括使用的培养基、血清类型及用量，以及适宜的pH值。

三、细胞建株的要点及基本过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：材料主要来自外科手术或活检的肿瘤组织。在取材时需避免使用坏死组织，应选择瘤细胞活力较强的部位，如瘤性转移淋巴结或胸腹水。取材后应尽快培养，若无法立即培养，应进行冻存。培养与冻存的方法与正常组织相同。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常混杂有成纤维细胞，这会抑制癌细胞的生长，因此需仔细清除。常用的排除方法包括机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法及胶原酶消化法等。

3. 提高肿瘤细胞的存活率和生长率：因肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的肿瘤细胞系更具挑战性。应对新环境中的生长状态进行适应，采用适宜的培养底物如鼠尾胶原，使用促进细胞生长的因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等），或考虑采用动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建株的方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，再加入2ml RPMI 1640培养基。

2. 混匀后，沿管壁缓慢加入到预先准备好的4ml淋巴细胞分离液表面，静置30分钟。

3. 在1500rpm下离心15分钟，吸取白细胞层（第二层）到另一离心管中。

4. 用5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种到1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EB病毒液，混匀。

6. 在温育箱中以40次/分、37℃培养3小时。

7. 离心1500rpm、15分钟后，将细胞接种到含有1ml培养基（含谷氨酰胺1mM/ml）的管中，加入10μl环胞霉素，轻轻混匀并在37℃下培养。

8. 5天后观察细胞转化与生长情况，决定是否进行半量换液。通常需进行1-2次的半量换液，并维持环胞霉素的浓度。

9. 待转化细胞数量明显上升且出现细胞团块后，转入25ml细胞培养瓶中，加入1-2ml培养基，继续在37℃培养10-15天，每3-4天观察一次以决定是否换液或传代。

10. 当细胞生长达到一定数量后进行冻存，冻存前应进行核型分析并进行存档。

以上步骤显示了建立细胞系的要求及过程，确立了具备科研价值的细胞群体。选择尊龙凯时作为品牌，确保为科研和医疗领域提供可靠的生物材料与技术支持，助力卓越的实验与研究成就。