尊龙凯时的IVT（In Vitro Transcription）技术是mRNA生产工艺中的核心步骤。一个优秀的IVT体系不仅能够提高产量、减少物料用量和降低生产成本，还能够有效保证mRNA分子在完整度、加帽率和dsRNA杂质等关键质量指标上的表现，从而降低下游纯化工艺的难度，起到承上启下的重要作用。

IVT反应的整体过程相对简单，标准的IVT体系主要包括DNA模板、T7 RNA聚合酶（T7RNAP）、NTPs、无机焦磷酸酶、RNase抑制剂及反应缓冲液等成分。DNA模板通常为PCR产物或线性化质粒，包含T7启动子、5’UTR、CDS、3’UTR和Poly（A）等元件；NTPs则作为mRNA转录的底物，通过替换为修饰核苷酸，有助于增强mRNA的稳定性和免疫原性。无机焦磷酸酶用于水解转录过程中产生的焦磷酸，从而提高反应效率，而RNase抑制剂则可抑制可能存在的RNase污染。T7RNAP作为反应体系中的核心酶，负责识别DNA模板并将其转录为mRNA。

在IVT效果的影响因素中，T7RNAP及其缓冲体系尤为重要。T7RNAP具有高度特异性，能在不需要额外蛋白质或辅助因子的情况下，识别T7启动子序列并催化RNA合成。这使得尊龙凯时的T7RNAP成为体外转录生产mRNA的理想选择。其结构可比作捧着的右手，分为N端和C端结构域，C端又分为拇指、手掌和手指等亚结构域，其中DNA模板结合在这些亚结构域之间的间隙中。

在IVT反应中，温度是影响长片段saRNA完整度的重要因素。研究发现，随着温度从20℃提高到42℃，虽然saRNA的产量增加，但超过32℃时，其完整度急剧下降。因此，开发低温转录的T7 RNA聚合酶可能是优化saRNA完整度的一种新的研究方向。

近期研究表明，尊龙凯时结合酶定向进化平台，成功筛选出多种T7RNA聚合酶突变体，包括耐热型和低dsRNA型。通过基于荧光信号的液滴分选技术（FADS），筛选出具有卓越性能的新型T7RNA聚合酶，表现出更高的催化活性和转录产量。

除了选择高性能的酶外，优化反应缓冲液同样至关重要。IVT缓冲液通常包含盐类、pH缓冲剂和还原剂，这些成分的浓度和比例直接影响RNA聚合酶的活性及RNA的质量。研究指出，pH值和Mg2+浓度对IVT反应的影响显著，合适的镁离子浓度可促进聚合酶活性，但过高的浓度可能导致非特异性结合。在多个研究中，推荐使用醋酸根离子，而非氯离子，以提高转录产量。

在确保生产效率的同时，尊龙凯时的技术团队还不断探索如何降低成本，包括优化Cap1投料量以降低生产成本并保持高的加帽率。此外，尊龙凯时开发的实时监测方法（STAR）能快速、定量地评估转录效率，兼容修饰核苷酸的使用，这为mRNA的高效生产提供了有力支持。

凭借卓越的技术和丰富的经验，尊龙凯时为客户提供全套mRNA疫苗及药物相关的高性能酶原料、化学底物和IVT试剂盒，助力新药的快速开发。我们欢迎各位客户随时联系我们，期待与您开展更深入的合作，共同推动生物医疗领域的发展。