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GPCR19激动剂操作规程 - 尊龙凯时生物医疗指南

来源:宗政蓓珊 日期:2025-03-25

**GPCR19激动剂(TGR5受体激动剂)操作规程**
根据生物医学领域标准,以下是针对GPCR19激动剂实验的操作流程。

GPCR19激动剂操作规程 - 尊龙凯时生物医疗指南

**步骤一:细胞培养**
在96孔板中,每孔加入100μL细胞悬液。一般情况下,对于细胞增殖实验,每孔添加约2000个细胞(100μL)。而在细胞毒性实验中,每孔添加的细胞数量应在5000至10000个之间(具体数量需根据细胞大小、增殖速度等因素决定)。将96孔板放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

**步骤二:添加化合物**
然后,按照实验要求,向每孔中加入0至10μL的受试化合物,以确保每个孔的药物浓度适宜。

**步骤三:细胞孵育**
将96孔板置于37℃、5% CO2及100%湿度的细胞培养箱中,孵育适当的时间,以促进细胞与药物的相互作用。

**步骤四:制备MTT溶液**
将5×MTT溶液用稀释液稀释至1×MTT。

**步骤五:MTT反应**
向每个孔加入50μL 1×MTT溶液,并在37℃孵育4小时,以使MTT被细胞还原为甲臜。

**步骤六:处理样品**
吸去上清液后,在每孔中加入150μL DMSO以溶解甲臜,并通过平板摇床摇匀。

**步骤七:光密度测定**
使用酶标仪在570nm波长下检测每孔的光密度。如果没有570nm滤光片,可以选择560-600nm的其他滤光片进行检测。

**步骤八:结果分析**
- **细胞存活率**:计算各测试孔的OD值,减去背景OD值(如培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔的OD值(如培养基加不同稀释度的受试药物加MTT,无细胞)。对各重复孔的OD值取平均数 ± SD。细胞存活率用T/C%表示,其中T为加药细胞的OD值,C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。
- **药物浓度计算**:求出当T/C = 50%时的IC50药物浓度,以及T/C = 10%时的IC90药物浓度。

本文使用的实验操作规程结合了尖端的生物医学理论,充分展示了尊龙凯时在GPCR19激动剂研究中的应用,为研究者提供了可靠的参考。

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