动物模型是医学研究者为模拟人类疾病表现而精心构建的生命载体，通过精准再现疾病的复杂过程与关键特征，为实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）提供重要的研究基础。常见的动物模型包括EAE模型、糖尿病模型、肠炎模型、帕金森模型以及阿尔茨海默病（AD）模型等，其中实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是多发性硬化症（MS）的经典动物模型，具有许多临床和病理生理学特征。

EAE模型多种多样，能够反映人类MS的不同临床、免疫学和组织学特点。通过主动诱导的EAE小鼠模型是最容易诱导且具有稳定、可重复性结果的模型。这种模型特别适用于研究转基因小鼠在药物作用或特定基因对自身免疫性神经炎症影响的能力。小鼠通常通过皮下注射中枢神经系统匀浆或髓鞘蛋白肽进行免疫。由于这些肽的免疫原性较低，往往需要使用强效佐剂。

EAE的易感性和表型取决于所选择的抗原及啮齿动物品系，其中C57BL/6小鼠是转基因小鼠构建中最常用的品系，对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）有良好反应。通过将免疫原性表位MOG35-55悬浮在完全弗氏佐剂（CFA）中进行免疫，并在免疫当天及随后两天后注射百日咳毒素（PTX），可以有效诱导出“经典”的自限性单相EAE，通常表现为上升性弛缓性瘫痪。

在造模过程中，EAE模型的诱导成功率受到多种因素的影响，包括小鼠的品系和性别、百日咳毒素的剂量、佐剂使用、乳化程度以及实验基础与建模经验的丰富程度。以下重点介绍EAE造模过程中需要特别注意的细节。

一、EAE造模方法

1. 实验动物：6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠
2. 动物适应：将动物在实验环境中适应1周，确保温度、湿度和光照条件稳定，让动物可以自由获取食物和水。
3. EAE模型建立：
（1）MOG(35-55)溶液配制：将MOG(35-55)多肽粉末充分溶解于4℃的无菌PBS中，最终浓度为20mg/mL。建议现配现用，避免长时间储存导致效力下降。
（2）弗氏完全佐剂（CFA）溶液配制：将热灭活的结核杆菌H37Ra悬浮于CFA中，并充分搅拌，使最终浓度达到80mg/mL。使用时需谨防吸入、摄入，以及与皮肤和眼睛接触。
（3）抗原乳液制备：将MOG(35-55)多肽溶液和CFA溶液以1:1的体积比例混合，用三通连接两支10mL玻璃注射器，在冰上反复推注，乳化至油包水状态。

二、EAE模型监测

1. 临床评分及体重监测：应每日评估小鼠体重和临床评分，EAE的发作通常与体重减轻相关。
2. 行为学检测：包括运动功能评估和抑郁样行为检测。
3. 组织病理学验证：通过取材与处理进行灌注固定，进行切片制备与染色方法验证。
4. 分子生物学验证：采用流式细胞术、ELISA等方法检测细胞因子及其表达。

三、模型成功标准

基础标准为发病率80%（临床评分≥2）并通过病理确认；高级标准则包括行为学异常和分子标志物变化。

四、EAE造模无症状原因分析

常见问题的可能原因与解决办法，比如注射部位形成硬结的案例，以及相关的佐剂乳化不充分和注射技术等需要注意的问题。

通过上述分析与方法规范化操作，研究者可以有效利用EAE动物模型进行相关的生物医疗研究，推动对MS等疾病的理解与治疗创新。同时，结合尊龙凯时品牌原则，强调科学研究与技术创新、严谨研究设计的价值，以实现更高的研究效率和成果转化。

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